Was ist der Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinierung? - Unterschied Zwischen

Was ist der Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinierung?

Das Hauptunterschied zwischen warmer und kalter trypsinisierung ist das Warme Trypsinisierung ist an der Inkubation von Geweben mit warmem Trypsin bei 36,50 ° C beteiligt, während kalte Trypsinisierung beim Einweichen von Geweben in kaltem Trypsin bei 4 ° C und anschließender Inkubation bei 36,50 ° C beteiligt ist. Darüber hinaus ist die Schädigung der Zellen bei der warmen Trypsinisierung hoch, während die kalte Trypsinisierung die verlängerte Wirkung des warmen Trypsins auf das Gewebe minimiert.

Warme und kalte Trypsinisierung sind die beiden Techniken der Trypsinisierung, ein Verfahren zur enzymatischen Aufgliederung von Geweben, die in der primären Zellkultur verwendet werden. Trypsin ist hier ein proteolytisches Enzym, das die Proteine ​​abbaut, die für das Anhaften der Zellen in Kulturen verantwortlich sind.

Wichtige Bereiche

1. Was ist warme Trypsinierung?
- Definition, Methode, Bedeutung
2. Was ist kalte Trypsinierung?
- Definition, Methode, Bedeutung
3. Was sind die Ähnlichkeiten zwischen warmer und kalter Trypsinisierung?
- Überblick über gemeinsame Funktionen
4. Was ist der Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinierung?
- Vergleich der wichtigsten Unterschiede

Schlüsselbegriffe

Anhaften von Proteinen, kalte Trypsinisierung, enzymatische Disaggregation, primäre Zellkultur, Trypsin, warme Trypsinisierung


Was ist warme Trypsinierung?

Die warme Trypsinisierung ist eine der zwei Arten von Trypsinisierungsverfahren, die bei der enzymatischen Desaggregation von Geweben verwendet werden, während sie für die Primärzellkultur vorbereitet werden. Bei der Desaggregation wird direkt warmes Trypsin bei 36.50 ° C verwendet. Zuerst wird das geschnittene Gewebe mit DBSS (Dissektions-Basalsalzlösung) gewaschen und dann mit warmem Trypsin in einen Kolben gegeben. Die dissoziierten Zellen befinden sich im Überstand und alle 30 Minuten wird der Inhalt des Kolbens gerührt, um dissoziierte Zellen zu gewinnen. Dann wird der Mischung frisches Trypsin zugesetzt. Dieses Verfahren kann für 3-4 Stunden fortgesetzt werden, während dissoziierte Zellen gewonnen werden. Schließlich kann Trypsin durch Zentrifugation aus der Mischung entfernt werden.


Abbildung 1: Warme Trypsinisierung

Außerdem ist die warme Trypsinisierung die effektivste Methode der Zellernte, da warmes Trypsin direkt verwendet wird. Dieser Vorgang kann auch innerhalb weniger Stunden abgeschlossen werden. Die Ausbeute der lebensfähigen Zellen ist jedoch aufgrund der nachteiligen Wirkung von warmem Trypsin geringer.

Was ist kalte Trypsinierung?

Die kalte Trypsinisierung ist die zweite Methode der Trypsinisierung. Es ist weniger wirksam, liefert jedoch eine große Menge an lebensfähigen Zellen. Ein Nachteil der kalten Trypsinisierung ist die Zeit, die zum Abschluss des Verfahrens benötigt wird. Im Allgemeinen werden die präparierten Gewebe zuerst bei 4 ° C für etwa 6 bis 24 Stunden mit kaltem Trypsin getränkt. Dann wird das gewonnene Gewebe mit restlichem Trypsin bei 36,50 ° C für 20 bis 30 Minuten inkubiert. Wiederholtes Pipettieren hilft, die dissoziierten Zellen zu zerstreuen.


Abbildung 2: Kalte Trypsinisierung

Wie bereits erwähnt, ist das Risiko für geschädigte Zellen aufgrund der längeren Exposition gegenüber warmem Trypsin bei dieser Methode jedoch minimal. Daher zeigt dieses Verfahren eine verbesserte Zelllebensfähigkeit in Kultur. Aufgrund der fehlenden Zentrifugation ist dieses Verfahren auch für ein herkömmliches Labor geeignet. Der Hauptnachteil dieser Methode ist jedoch, dass sie nicht für große Gewebemengen gleichzeitig verwendet werden kann.

Ähnlichkeiten zwischen warmer und kalter Trypsinisierung

  • Warme und kalte Trypsinisierung sind die beiden Techniken der Trypsinisierung, bei denen Trypsin zur enzymatischen Auflösung von Adhärenzproteinen in Zellkulturen verwendet wird.
  • Beide Verfahren können verwendet werden, während Gewebe für primäre Zellkulturen vorbereitet werden.
  • Darüber hinaus verwenden beide Verfahren irgendwann warmes Trypsin bei 36,50 ° C.
  • Außerdem helfen sie dabei, Zellen zu isolieren.

Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung

Definition

Warme Trypsinisierung bezieht sich auf eine der beiden Methoden der Trypsinisierung, die an der Inkubation des Gewebes mit Trypsin bei 36,50 ° C beteiligt sind, gefolgt von der Entfernung von Trypsin durch Zentrifugation, während sich die kalte Trypsinisierung auf die andere Methode der Trypsinisierung bezieht, die beim Tränken mit Trypsin bei 4 auftritt ° C gefolgt von der Inkubation mit Trypsin bei 36.50 ° C. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen warmer und kalter Trypsinierung.

Verwendung von warmem Trypsin (36,50 ° C)

Ein weiterer Hauptunterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung besteht darin, dass das Gewebe bei warmem Trypsin 3-4 Stunden mit warmem Trypsin behandelt wird, während das Gewebe 20 bis 30 Minuten mit warmem Trypsin inkubiert wird.

Zentrifugation

Zentrifugation ist ein weiterer Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung. Die Zentrifugation ist bei der warmen Trypsinisierung unerlässlich, um Trypsin aus der Probe zu entfernen, während bei der kalten Trypsinisierung keine Zentrifugation erforderlich ist.

Wirksamkeit

Warme Trypsinisierung ist auch effektiver, während kalte Trypsinisierung weniger effektiv ist.

Bedeutung

Außerdem ist ihre Bedeutung ein weiterer Unterschied zwischen der warmen und kalten Trypsinisierung. Warme Trypsinisierung kann die Zellen im Gewebe schädigen, während bei der kalten Trypsinisierung der nachteilige Effekt der warmen Trypsinisierung beseitigt wurde.

Die Ausbeute an lebensfähigen Zellen

Die Ausbeute an lebensfähigen Zellen ist ein weiterer Unterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung. Die warme Trypsinisierung ergibt eine geringere Menge an lebensfähigen Zellen, während die Ausbeute an lebensfähigen Zellen bei der kalten Trypsinisierung hoch ist.

Zeit

Darüber hinaus erfordert die warme Trypsinisierung weniger Zeit, um das Verfahren abzuschließen, während die kalte Trypsinisierung mehr Zeit erfordert.

Anwendungen

Darüber hinaus wird die warme Trypsinisierung für Gewebe mit extrazellulärer Matrix und fibrösem Bindegewebe verwendet, während die kalte Trypsinisierung für Weichgewebe wie embryonale Organe verwendet wird.

Fazit

Warme Trypsinisierung ist eine Methode der Trypsinisierung, bei der warmes Trypsin bei 36,50 ° C zur Behandlung von Gewebe verwendet wird, um anhaftende Proteine ​​abzubauen. Obwohl es sich um eine wirksame Methode der enzymatischen Zerlegung von Geweben handelt, werden aufgrund der nachteiligen Wirkung von warmem Trypsin weniger lebende Zellen erhalten. Im Vergleich dazu ist die kalte Trypsinisierung die zweite Methode der Trypsinisierung, bei der das Gewebe vor der Inkubation mit warmem Trypsin bei 4 ° C mit kaltem Trypsin getränkt wird. Diese Methode ist weniger effektiv, liefert jedoch eine große Anzahl lebensfähiger Zellen. Daher besteht der Hauptunterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung in der Verwendung von warmem Trypsin und der Wichtigkeit jeder Methode.

Verweise:

1. "Trypsinisierung"ScribdScribd,