Was ist der Unterschied zwischen indirektem und Sandwich-ELISA? - Unterschied Zwischen

Was ist der Unterschied zwischen indirektem und Sandwich-ELISA?

Das Hauptunterschied zwischen indirektem und Sandwich-ELISA ist das Im indirekten ELISA wird die Mikrotiterplatte mit der Probe mit nachzuweisenden Proteinen beschichtet, während diese Platte im Sandwich-ELISA mit Primärantikörper beschichtet wird. Außerdem ist der Sandwich-ELISA 2- bis 5-fach empfindlicher als der indirekte ELISA.

Indirekter und Sandwich-ELISA sind zwei ELISA-Verfahren (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), bei denen es sich um Festphasen-Enzymimmunoassays (EIA) handelt. Sie sind vergleichsweise empfindliche Methoden, die auch schneller und reproduzierbar sind.

Wichtige Bereiche

1. Was ist ein indirekter ELISA?
- Definition, Verfahren, Bedeutung
2. Was ist Sandwich-ELISA?
- Definition, Verfahren, Bedeutung
3. Was sind die Gemeinsamkeiten zwischen Indirekt- und Sandwich-ELISA?
- Überblick über gemeinsame Funktionen
4. Was ist der Unterschied zwischen indirektem und Sandwich-ELISA?
- Vergleich der wichtigsten Unterschiede

Schlüsselbegriffe

ELISA, Enzymgebundener Sekundärantikörper, Indirekter ELISA, Primärantikörper, Sandwich-ELISA, Sensitivität


Was ist der indirekte ELISA?

Indirekter ELISA ist ein Typ eines zweistufigen ELISA, bei dem zwei Arten von Antikörpern zum Nachweis und zur Quantifizierung eines spezifischen Proteins in einer Probe verwendet werden. Das Verfahren des indirekten ELISA ist wie folgt.

  • Beschichten der Oberfläche der Mikrotiterplatte mit der Probe;
  • Waschen, um ungebundene Proteine ​​von der Platte zu entfernen;
  • Inkubation der mit Protein beschichteten Mikrotiterplatte mit dem primären Antikörper;
  • Waschen, um ungebundene Antikörper von der Platte zu entfernen;
  • Inkubation der Mikrotiterplatte mit dem enzymgebundenen sekundären Antikörper;
  • Waschen, um ungebundene Antikörper von der Platte zu entfernen;
  • Zugabe des entsprechenden chromogenen Substrats, das für die enzymatische Reaktion erforderlich ist;
  • Erkennung der von der Platte erzeugten Signale.


    Abbildung 1: Indirekter ELISA

Im Allgemeinen ist der indirekte ELISA eine gute Methode zur Diagnose bakterieller, viraler oder parasitärer Infektionen durch Quantifizierung von Antikörpern, die vom Körper gegen die pathogenen Antigene produziert werden. Hier können polyklonale Antikörper als sekundärer Antikörper im indirekten ELISA eingesetzt werden. Daher ist es wirtschaftlicher. Andererseits können verschiedene Arten von Primärantikörpern in unterschiedlicher Anzahl verwendet werden, um an das Zielprotein zu binden. Der indirekte ELISA ist somit eine entsprechend flexiblere und empfindlichere Methode zum Nachweis eines Zielproteins.

Was ist Sandwich-ELISA?

Der Sandwich-ELISA ist der andere Typ des zweistufigen ELISA, bei dem für den Nachweis sowohl primäre als auch enzymgebundene sekundäre Antikörper verwendet werden. Das Hauptmerkmal des Sandwich-ELISA besteht darin, dass das interessierende Protein zwischen primären und sekundären Antikörpern eingeschlossen wird. Das Verfahren für den Sandwich-ELISA ist wie folgt:

  • Beschichten der Oberfläche der Mikrotiterplatte mit dem primären Antikörper;
  • Waschen, um ungebundene primäre Antikörper von der Platte zu entfernen;
  • Inkubation der Mikrotiterplatte mit der Probe;
  • Waschen, um ungebundene Proteine ​​von der Platte zu entfernen;
  • Inkubation der Mikrotiterplatte mit dem enzymgebundenen sekundären Antikörper;
  • Waschen, um ungebundene sekundäre Antikörper von der Platte zu entfernen;
  • Zugabe des entsprechenden chromogenen Substrats, das für die enzymatische Reaktion erforderlich ist;
  • Erkennung der von der Platte erzeugten Signale.


    Abbildung 2: Sandwich-ELISA

Bezeichnenderweise eignet sich Sandwich-ELISA zum Nachweis von Proteinen mit niedrigem bis hohem Molekulargewicht. Es ist auch empfindlicher (2-5 mal) als der direkte oder indirekte ELISA. Darüber hinaus ist der Sandwich-ELISA eine spezifischere Technik, da zwei Antikörper verwendet werden, um das Zielprotein einzufangen.

Ähnlichkeiten zwischen indirektem und Sandwich-ELISA

  • Indirekter und Sandwich-ELISA sind zwei Arten von ELISA-Methoden, mit deren Hilfe Proteine ​​in einer biologischen Probe nachgewiesen und quantifiziert werden können.
  • Beide Arten von ELISA-Methoden bestehen aus zwei Schritten.
  • Darüber hinaus verwenden sie sowohl primäre als auch enzymgebundene sekundäre Antikörper zum Nachweis eines spezifischen Proteins, einschließlich Antigenen, Antikörpern, Hormonen usw.
  • Aufgrund der Beteiligung von zwei Arten von Antikörpern an diesen beiden Arten von Assays ist ihre Spezifität hoch.
  • Beide Verfahren sind zudem Hochdurchsatzverfahren, die auch sehr empfindlich sind. Sie sind schnellere und reproduzierbare Assays.

Unterschied zwischen indirektem und Sandwich-ELISA

Definition

Indirekter ELISA bezieht sich auf einen zweistufigen ELISA, der zwei Bindungsprozesse des primären Antikörpers und des markierten sekundären Antikörpers umfasst, während sich der Sandwich-ELISA auf einen anderen zweistufigen ELISA-Typ bezieht, bei dem das interessierende Protein zwischen einem primären und einem sekundären Antikörper liegt. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen indirektem und Sandwich-ELISA.

Beschichten der Mikrotiterplatte

Bei indirektem ELISA ist die Beschichtung der Mikrotiterplatte die Probe mit Proteinen, während bei Sandwich-ELISA die Beschichtung der primäre Antikörper ist.

Bindung des sekundären Antikörpers

Der sekundäre Antikörper bindet im indirekten ELISA an den primären Antikörper, während der sekundäre Antikörper im Sandwich-ELISA an das interessierende Protein bindet.

Empfindlichkeit

Ein weiterer Unterschied zwischen indirektem und Sandwich-ELISA ist, dass der indirekte ELISA eine empfindliche Methode ist, während der Sandwich-ELISA 2- bis 5-fach empfindlicher ist als der indirekte ELISA.

Anwendungen

Während der indirekte ELISA zur Bestimmung der Gesamtantikörperkonzentration in Proben besser ist, ist der Sandwich-ELISA für die Analyse komplexer Proben besser. Dies ist ein weiterer Unterschied zwischen indirektem und Sandwich-ELISA.

Fazit

Indirekter ELISA ist ein Typ eines zweistufigen ELISA, der an der Bindung des primären Antikörpers an das interessierende Protein auf der Mikrotiterplatte beteiligt ist, gefolgt von dem Nachweis durch einen enzymgebundenen sekundären Antikörper. Andererseits ist der Sandwich-ELISA der andere Typ eines zweistufigen ELISA, der an der Bindung des Proteins von Interesse an den primären Antikörper beteiligt ist, der die Mikrotiterplatte bedeckt, gefolgt von der Detektion mit dem enzymgebundenen sekundären Antikörper. Daher besteht der Hauptunterschied zwischen indirektem und Sandwich-ELISA in der Reihenfolge des Verfahrens.

Verweise:

1. "TechNote: Was sind die Unterschiede zwischen den ELISA-Assay-Typen?"Enzo Life Sciences27. Juli 2018,